自体外周血干细胞移植治疗PAD的研究

摘要目的 探讨自体外周血干细胞移植术治疗下肢动脉缺血性疾病的临床效果。方法 回顾性分析10例行下肢血管造影检查确诊的下肢动脉症闭塞患者(16条患肢),采用自体外周血干细胞移植术治疗的临床资料。结果 经治疗后,患者静息痛缓解,溃疡愈合,间歇性跛行距离、时间延长。结论 自体外周血干细胞移植术治疗下肢缺血性疾病具有安全、可行且有效的优点,是治疗下肢缺血性疾病的一种新手段,值得临床推广应用。
关键词:下肢;缺血性疾病;干细胞;移植
   下肢动脉缺血性疾病(Peripheral artefial disease,PAD)包括血栓闭塞性脉管炎、动脉硬  化性闭塞症和糖尿病足等,药物及手术对其治疗效果欠佳,截肢率高达5%[1]。治疗性血管生成是利用血管诱导因子或内皮祖细胞,模拟体内血管生成机制,从而达到并促进血管新生、改善侧支及微循环的目的。国内外研究证实,干细胞移植术可以在缺血局部形成新生血管,改善下肢缺血症状[2-3]。本院自2004年1月开展自体外周血干细胞移植治疗下肢缺血性疾病,疗效显著,现报道如下。
1  资料与方法
1.1  一般资料
   病例来源于宁夏医科大学第二附属医院,2004年1月~2010年12月期间,采用自体外周血干细胞移植治疗下肢动脉缺血性疾病患者10例,其中男7例,女3例,共16条患肢,年龄40~70(54.67±6.13)岁,病程0.5~10(5.42±1.76)年。疾病类型:糖尿病足2例(4条患肢),动脉硬化性闭塞症4例(8条患肢),血栓闭塞性脉管炎2例(4条患肢)。Fontaine分期:Ⅱ期1条患肢,Ⅲ期10条患肢(6处溃疡),Ⅳ期5条患肢。踝肱比值(ABI):0.1~0.57者12条患肢,ABI<0.1者4条患肢。踝压20~50mmHg。经皮血氧饱和度测不到,表明患者存在严重的动脉缺血。
1.2  移植方法
1.2.1  自体外周血干细胞动员、采集 术前皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(商品名:惠尔血G-CSF),300µg/d,连续5天。进行动员的同时,每天皮下注射肝素钠(商品名:法安明)一次,5000U/d,连续两天,防止血液高凝,加重缺血。动员第5天早上9点采用COBE SPECTRA 6.1血细胞分离机进行外周血干细胞采集,采集前2h静脉注射地塞米松l0mg。
1.2.2  干细胞移植术 预先在缺血下肢作等距离网格标记,将采集的干细胞悬液配置成2×108/ml,在连续硬膜外麻醉下严格消毒后,按3cm×3cm间距行干细胞混悬液肌肉注射,每点注射1ml,沿闭塞动脉走行给予多点注射,重点注射溃疡周围。
1.3  辅助治疗
   控制血压、血糖和血脂等,按时改善微循环,溃疡定期换药。
1.4  观察指标
   观察并比较患者术前及术后2周、1个月、2个月和3个月临床症状、辅助检查客观指标的变化情况,并对其进行评估。主要观察指标包括疼痛、冷感、ABI、溃疡愈合和动脉血管造影情况。
2 结果
2.1  干细胞采集情况 动员的第5天,10例患者外周血白细胞水平均达(32.6~68.7)×109/L,平均40.1×109/L。采集单核细胞悬液总量96~120ml,平均106ml。单核细胞总数为(84.06±21.39)×108,CD34+细胞(25.02±15.76)×107。
2.2  疼痛、冷感缓解、溃疡愈合情况 10例病例基本于2周后疼痛、冷感症状逐渐缓解,移植后3个月,15条患肢(93.8%)疼痛缓解,14条患肢(87.5%)冷感好转,经治患者仍有间歇性跛行,建议患者逐渐增加运动量,跛行时间和距离逐渐延长,其中效果最好者跛行距离从10m增长到2Km。干细胞移植术后3个月,6处溃疡有2处愈合(33.3%),4处明显缩小(66.4%),5条患肢坏疽中3条足趾湿性坏疽转为干性坏疽。5条患肢明显改善,局部血液循环好转。
2.3  ABI、DSA 治疗3个月后,有15条(93.8%)患肢ABI增加0.2~0.6,1条患肢无明显变化。治疗3个月后,行造影检查10患肢病变部位侧支血管丰富,5条病变部位侧支血管增多,1条无明显变化。
3  讨论
   随着生活水平的提高,以及人口进入老龄化时期,下肢缺血性疾病也呈逐年增长趋势。目前,虽然新的药物不断出现,手术方法不断改进,介入治疗技术不断提高,但是仍有部分PAD患肢治疗效果欠佳,面临截肢。近年来,逐步发展自体干细胞移植技术给患者带来了新的希望,1997年Asahara等首先在外周循环血中分离出血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC),并证实“出生后血管形成”的存在。1999年,Isner等提出了“治疗性血管形成”的概念,该方法充分利用成年人机体血液循环中存在EPC,以及EPC对局部缺血组织具有的自动趋化和归巢能力,最终EPC分化形成血管这一机制。此外外周血中分离到的来源于骨髓的EPC亦已得到证实。通过G-CSF对外周血动员,外周血中EPC含量能明显增加,这为外周血干细胞移植治疗下肢动脉缺血提供理论依据。我们采用APBSCT治疗10例PAD患者(16条患肢),结果显示大部分患者疼痛减轻,溃疡面缩小,使一部分Foutaine IV期患者避免截肢。与国内外报道的结果相似[2-5]。目前干细胞治疗缺血性疾病成为热点,国内运用自体干细胞移植术在治疗心肌梗死、下肢缺血等领域的应用也均取得了一定的疗效。
   本组10例患者(16条患肢)在术前都不同程度的接受过药物保守治疗,最长的治疗达1年以上,症状不能改善,甚至濒临截肢边缘,遂接受干细胞移植治疗。经治疗后患者短期内症状均得到一定改善,静息痛缓解,止痛药物应用减少,肢冷缓解,肤温升高,溃疡愈合,随治疗时间延长,患者患肢疼痛、溃疡为复发,活动时间及距离延长,证明该手术对下肢动脉缺血性疾病的症状有确切的疗效,短中期疗效肯定。我们在治疗过程中,发现采用APBSCT治疗PAD,应注意以下事项:①为获得足够EPC,应确保干细胞动员的质量和采集数量;②干细胞动员过程中,可暂时性引起白细胞显著升高、血液粘稠度增高,存在引起心肌梗死、脑梗死或加重原有患肢缺血的风险,在动员期间应用抗凝药对症治疗可降低此风险;③注意干细胞移植部位,干细胞应注射至患肢肌肉组织中,可对溃疡周围缺血明显处给予重点注射,以保证疗效。
   总之,外周血干细胞移植对改善肢体缺血局部血液循环具有十分重要的意义。外周血中提取获得干细胞简单、方便、经济,干细胞移植必将成为治疗缺血性疾病的一种新手段。
参考文献
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[2]Tateishi-Yuyama H,Matsubara H,Murohara T,et a1.Therapeutic angiognesis for patient with limb ischaemia byautologous transplantation of bone marrow cell:a pilot study and a randomized controlled trial[J].Lancet,2002,360:427-435.
[3]黄平平,李尚珠,韩明哲,等.自体外周血干细胞移植治疗下肢动脉硬化性闭塞症[J].中华血液学杂志,2003,24(6):308-311.
[4]吴雁翔,杨晓风,王红梅,等.干细胞治疗下肢缺血性疾病疗效观察[J].中国修复重建外科杂志,2005,19(12): 1019-1021.
[5]谷涌泉,张建,齐赢行,等.自体骨髓干细胞移植治疗慢性下肢缺血94例不同病变分期患者的效果比较[J].中国临床康复,2005,9(38):7-10.


    2014/10/21 17:48:46     访问数:1187
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