凝血因子和抗凝蛋白检测诊断急性静脉血栓栓塞症

作者:邓昊昱[1] 陈佳佺[1] 谢辉[2] 袁凯[1] 沈薇[1] 顾怡[1] 张皓[1] 张纪蔚[1] 张岚[1] 
单位:上海交通大学医学院附属仁济医院[1]
海交通大学医学院附属仁济医院[2]
【摘要】目的 探讨急性静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism,V7rE)患者凝血因子与抗凝 蛋白水平对评估其患病风险的影响和意义。方法 采用一期凝固法、发色底物法,检测76例急性静 脉血栓栓塞症患者(VTE组)和81例健康对照人群(对照组)的凝血因子活性(FII、FV、FVII、FVIII、 FIX、FX、FXI、FXII),抗凝蛋白(antithrombin activity)AT、PC活性。结果 (1)VTE组与健康对照组 凝血因子与抗凝蛋白值的比较:VTE组F 11、FV、FVIII、FIX、FX、FXI和FXII均较健康对照组显著升 高,差异有统计学意义(P<0.01)。VTE组PC值较健康对照组显著降低,差异有统计学意义(P< 0.01)。VTE组AT、FVII值与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Logistic回归分析显 示:VTE主要危险因素为FVIII、FX活性异常升高、PC活性异常下降,与健康对照组相比,差异均有统 计学意义(P<0.05)。(3)用ROC曲线分析:FVIII、FX和Pc对VTE早期诊断的价值,FVIII、FX和Pc 的AUC值分别为:0.934、0.765和0.350。结论 除FVII因子外,其余凝血因子活性异常升高与急性 VTE显著相关,其中FVIII敏感性、特异性最大,对于诊断急性VTE价值最大。FVIII活性异常增高与PC 活性异常降低是急性VTE独立危险因素。
【关键词】静脉血栓栓塞;血液凝固因子;蛋白质C;ROC曲线
Coagulation factors and anticoagulant protein assay for the dignosis of acute venous
thromboembolism DENG Haoyu, CHEN Jiaquan, XIE Hui, YUAN Kai, SHEN Wei, GU Yi, ZHANG Hao, ZHANG Jiwei, ZHANG Lan.Department of Vascular Surgery,Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Ren Ji Hospital, Shanghai 200127, China
Corresponding author:ZHANG Lan,Email:lucky200207@yahoo.com.cn
【Abstract】Objective  To analyze the variation of coagulation factors and anticoagulant proteins in acute venous thromboembolism(V’IE)and explore the significance of coagulation factors and anticoagulant protein in early diagnosis of VTE and their role i11 predicting risk factors. Methods  In this study.76 VTE cases were enrolled.81 eases served as healthy controls.Full automatic coagulation analyzer was used to determine the activity of coagulation factors(F II,F V,FⅦ,FⅧ,F IX,F X,F XI,and FⅫ).Chromogenic substrate method was used to detect the activity of AT and PC. Results  (1)In VTE group. the levels of FⅡ,FV,FⅧ,FIX,FX,FXI and FXll were higher than those in healthy control group(P<0.01).PC activity decreased significantly compared with healthy controls(P<0.01).There was nostatistical difference between VTE and healthy controls in F VII and AT activity.(2)Logistic regression indicated that the main risk factors of VTE were abnormal activity of FⅧ。F X and PC by a statistical difference(P<0.05).(3)ROC curve was used to analyze the vaule of FⅧ.FX and PC for early diagnosis of VTE,AUC of FⅧ,F X and PC were 0.934,0.765,0.350 respectively.Conclusions  Except FVII, abnormally increased levels of all coagulation factors were significantly associated with acute VTE.Decreased PC activity and increased activity of FⅧwere independent risk factors for acute VTE.Among all, FⅧis the most valuable by its higher specificity and susceptibility for early diagnosis of VTE.
【Key words】 Venous thromboembolisms; Blood coagulation factors;Protein C; ROC curve
   静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism,VTE)是一种危害非常严重的血管疾病,主要包括下肢深静脉血栓形成(deep venous thrombosis,DVT)和肺栓塞(pulmonary embolism,PE)。VTE的发生是建立在高凝状态的基础之上,而且约70%的PE和30%的DVT呈现隐匿发病模式,因此对于VTE发病危险因素的合理评估,有助于早期诊断VTE,避免因病情延误合理评估,有助于早期诊断VTE,避免因病情延误导致的病残率上升。本研究通过检测急性VTE患者凝血因子水平与抗凝蛋白浓度,评估其对于急性VTE的诊断价值。
资料与方法
1. 一般资料
   以2010年1月至2012年5月就诊于上海仁济医院血管外科的急性DVT和(或)PE患者为研究对象,VTE组人选标准为:经影像学诊断证实的急性症状性DVT和(或)PE;病程<2周。排除标准:正使用纤维蛋白溶解剂治疗发作的DVT和(或)PE;停用华法林抗凝治疗<2周(或)现正使用华法林等抗凝治疗的患者;严重肝脏疾病患者;活动性癌症患者或既往癌症史患者;红斑狼疮患者或既往红斑狼疮史患者;经筛查挑选出符合要求的VTE组76例,年龄:19~86岁,中位年龄61岁,其中男35例,女41例。并于我院健康体检中心收集对照组81例,年龄:23—78岁,中位年龄57岁,其中男41例,女40例。对照组均为同期健康体检者,否认VTE、糖尿病、肿瘤及心脑血管病史。所有患者和健康对照者均签署知情同意书,自愿参与此项研究。均签署知情同意书,自愿参与此项研究。
2. 样本采集与血液项目检测
   所有VTE患者均在标准抗凝治疗前采集静脉血液样本。采用凝固法检测凝血因子活性(FⅡ、FV、FVII、FⅧ、FIX、FX、FXI、FXII):0.109 mol/L枸橼酸钠1:9抗凝管2根,各2 ml,立即于4℃3000 r/min离心10 rain,分离乏血小板血浆;采用发色底物法检测抗凝蛋白AT、PC活性忙J。所有试剂均为德国西门子公司产品试剂,日本东亚SysmexCA-7000全自动血凝仪进行检测。
3. 统计学方法
   使用SPSS 17.0统计软件,2组间凝血因子和抗凝蛋白质的比较采用独立样本t检验,P<0.05,差异有统计学意义;采用二分类Logistic回归分析受试者患病的危险因素,并对受试者进行工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析,比较ROC曲线下面积(area under the curve,AUC),选择最佳工作点(optimal operating point,OOP),计算各指标敏感性和特异性,双侧P<0.05表示差异有统计学意义。
结果
1. 凝血因子与抗凝蛋白水平的比较
   VTE组F11、FV、FⅧ、FIX、FX、FXI和FXII均较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。VTE组Pc值较健康对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。V1´E组AT、FVII值与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

2. Logistic回归分析
   通过二分类Logistic回归分析对急性VTE进行风险因素评估,结果显示FⅧ、FX异常升高、PC值异常降低与急性VTE发病明显相关(表2)。

3.ROC曲线分析
   对于通过二分类Logistic回归分析筛选出的急性VTE危险因素进行ROC曲线分析,FⅧ、FX和PC的AUC分别为0.934、0.765和0.350。进一步分析该3类指标对于诊断急性VTE的敏感性与特异性,其值大小由最佳工作点的取值决定。设定敏感性>90%同时选择最高特异性,结果显示FⅧ对于诊断急性VTE的敏感性和特异性最高(表3)。

讨论

   血栓形成是指生理或病理情况下,凝血瀑布不同程度地被激活,循环血液中有形成分在血液中形成栓子,造成血管腔部分或完全阻塞。由于静脉血流较慢,凝血酶和其他凝血因子易在局部形成高浓度聚集与黏附,从而促成由纤维蛋白网罗血细胞形成红色血栓。
1. Ⅷ因子
   FⅧ是肝细胞合成的一种球蛋白,由2332个氨基酸残基组成,血浆含量0.1 mg/L,是所有血浆凝固酶中含量最低且最不稳定者,FⅧ作为FⅨa的辅因子参与对F X的激活,在钙离子存在的条件下,FⅧ与FIXa在磷脂表面形成复合物,加速FIXa对FX的激活,促进凝血酶形成。近年来,FⅧ升高与VTE之间的密切关系已得到广大共识。本研究表明,与对照组(99±28)相比,VTE组(247 4-119)FⅧ活性显著升高,两者差异有统计学意义(P<0.05),二分类Logistic回归分析显示:FⅧOR值为1.046,与VTE发病呈显著正相关,ROC曲线分析结果显示:当OOP为132.4时,其敏感性为90.8%,特异性为86.4%,具有很好的早期诊断价值,本研究认为FⅧ活性异常升高是导致VTE发病的独立危险因素,尤其当FⅧ水平较正常值范围上限增高2倍及以上,临床意义更大。近年来对于FⅧ研究已深入到基因水平,Nossent等口。已研究证实FⅧ基因变异可影响FⅧ水平并显著增加血栓形成风险性,Viel等。4o发现FⅧ基因多态性与FⅧ活性也显著相关。对于疑似VTE患者,我们应早期检测患者FⅧ水平,对于结果异常者,需行FⅧ基因测序排除基因突变与多态性,以期早期明确病因,对因治疗。
2. X因子
   FX是肝细胞合成的VitK依赖的凝血因子,以无活性的酶原形式存在,激活后方能发挥促凝血功能。FX同时参与内源性与外源性凝血途径,在外源性凝血途径中,F X被FⅨa—FⅧa—ca2+复合物激活为FXa,在内源性凝血途径中,FX被FⅧ一VVIIa复合物激活为FXa,共同参与凝血酶原的激活。可见FX在凝血瀑布中起到了举足轻重的作用。本研究结果显示,与对照组(116 4-26)相比,VTE组(171±78)FX活性显著升高,两者差异有统计学意义,二分类Logistic回归分析显示:F X OR值为1.041,其值与VTE发病呈显著正相关,因此本研究认为FX异常升高与急性VTE发生显著相关。ROC曲线分析结果显示:当OOP为92.9时,其敏感性为90.8%,特异性为16.0%,其检测敏感性较高,但特异性较低,容易导致假阳性的结果产生,故在临床工作中,需重视这一问题。
3. 蛋白C
   蛋白c是一种Vitk依赖的糖蛋白,主要由肝细胞合成,分布于血浆中,蛋白C分子在结构上含有3种结构域,分别为1.羧基谷氨酸结构域,表皮生长因子同源区域以及丝氨酸蛋白酶样结构域。其中丝氨酸蛋白酶样结构域为蛋白c的活性中心。Pc主要通过其活性形式APC(activated protein C,APC)参与灭活FV、FⅧa,并影响FXa与凝血酶的形成,从而阻止凝血过程的发展。本研究结果显示,与对照组(114 4-20)相比,VTE组(98 4-33)PC活性显著降低,两者差异有统计学意义,二分类Logistic回归分析显示:PC OR值为一0.066,其值与VTE发病呈负相关,ROC曲线分析结果显示:当OOP为48.5时,其敏感性为90.8%,特异性仅为2.2%。有关研究报道,PC缺陷症是亚洲人群中较为常见的抗凝蛋白缺陷症表现类型,除遗传易感性因素外,继发于严重肝病与口服华法林抗凝治疗等均能导致Pc活性下降,但本研究已排除继发因素所致的Pc活性下降,因此除外少数几例患者因遗传性Pc缺陷导致PC活性下降,可能有其他未知因素参与,导致VTE组PC活性下降。
4. 其他凝血因子 
   此外,其他凝血因子FⅡ、FV、FIX、FXI和FXII在VTE急性期也显著升高,但通过二分类Logistic回归分析显示,其值升高与急性期VTE不明显相关,也不具备显著的特异性与敏感性,故对于急性VTE的诊断价值而言,仍需要进一步研究。
   本研究显示对急性VTE患者进行FVIII、FX、PC检测具有较高的敏感性,但由于本组样本量偏少,需在今后的临床工作中进一步观察其实用性。

    2014/9/16 9:43:43     访问数:1464
    转载请注明:内容转载自365医学网

大家都在说       发表留言

客服中心 4000680365  service@365yixue.com
编辑部   editor@365yixue.com

365医学网 版权所有 © 365heart All Rights Reserved.

京ICP备12009013号-1
京卫网审[2013]第0056号
京公网安备110106006462号
京ICP证041347号
互联网药品信息服务资格证书(京)-经营性-2018-0016  
搜专家
搜医院
搜会议
搜资源
 
先点击
再选择添加到主屏